盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡單，但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多，分布在測(cè)定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測(cè)定中出現(xiàn)問題的可能原因，特對(duì)常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。   
臨床ELISA測(cè)定中可能會(huì)出現(xiàn)的問題及可能的原因問題 
可能的原因（非試劑盒本身的原因） 

1．弱陽性質(zhì)控樣本檢測(cè)不出 溫育的時(shí)間或溫度不夠；顯色反應(yīng)時(shí)間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問題 
2．測(cè)定的重復(fù)性差 （相同樣本兩次測(cè)定結(jié)果不一致） 這是典型的由測(cè)定操作引起的問題，包括 
（1）加樣本及試劑量不準(zhǔn)；孔間不一致； 
（2）加樣過快，孔間發(fā)生污染； 

（3）加錯(cuò)樣本； 

（4）加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁上部非包被區(qū)； 
（5）不同批號(hào)試劑盒中組分混用； 
（6）溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致； 
（7）孔內(nèi)污染雜物； 
（8）酶標(biāo)儀濾光片不正確； 

（9）血清標(biāo)本未*凝固即加入，反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血細(xì)胞，易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)等。
 3．白板 
（陽性對(duì)照不顯色） 
（1）漏加酶結(jié)合物； 

（2）洗板液配制中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈，含酶抑制物（如疊氮鈉）等。 
（3）漏加顯色劑A或B； 
（4）終止劑當(dāng)顯色劑使用。 

4．全部板孔均有顯色 
（1）洗板不干凈； 
（2）顯色液變質(zhì)； 

（3）加底物的吸光受酶污染； 
（4）洗板液受酶等污染。
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